DNA cutting
Na tomto pátečním workshopu z Intermédií jsme prováděli "Restriction Digest" s americkým lektorem. Po krátkém úvodu a vysvětlení práce jsme dostali zkumavky a pipetami jsme do nich dali DNA nějakého bakteriofágu, buffer a enzym. Vše v množství pouze několika µl. Řetězec DNA, která měla asi 4500 párů nukleotidů jsme takto pomocí enzymů (Eco R1, Hind III, Pst) rozdělili na několik různě dlouhých částí. Například enzym Hind III "rozsekal" všechna místa, kde se vyskytovala sekvence:
A|AGCTT
TTCGA|A
K tomu ale bylo potřeba nechat enzymy působit v lázni při teplotě 37°C, kdy enzymy pracují nejlépe. Potom náš lektor vyrobil gel, do kterého se daly jednotlivé vzorky a při průchodu elektrického proudu se jednotlivé části DNA začali gelem pohybovat směrem k + elektrodě a pod modrým světlem díky přidanému barvivu žlutě fosforeskovaly. Ale čím byly kusy DNA větší, tím pomaleji skrz gel prostupovaly a v gelu se po pár desítkách minut vytvořili proužky značící jednotlivé fragmenty.
Apr 11, 2008
Photos: 11
